送样指南


溶液蛋白定性:

图示(× 表示溶液中不能含有或不适用 √ 表示可以含有或者适用)
IP 产物



注意:  如果目的蛋白分子量大小在25KDa或者50KDa,我们推荐使用竞争性洗脱(例如flag标签蛋白被flag多肽竞争洗脱)  抗体是IP产物中的高丰度蛋白,会影响整个蛋白鉴定数量。部分科研者采用直接检测分析,导致未发现感兴趣蛋白,非常抱歉AIMS无法为您承担此风险,请谅解。 粗提蛋白混合物

凝胶蛋白定性

目的蛋白切胶检测

全蛋白切胶检测

Notes:
PVDF或者NC膜上的蛋白不能进行质谱检测。

样本准备Q&A:

Q: 用于质谱检测的蛋白溶液样品溶剂要求?
A: 蛋白溶液 SDS 含量低于 0.1 %
Q: 用于质谱检测的蛋白溶液样品蛋白量要求?
A:单一蛋白溶液蛋白总量不少于 1 5μg;混合蛋白溶液蛋白总量不少于 50μg(若 各成分蛋白含量相差较大, 含量较少的蛋白不易被检测到)
Q: 用于质谱检测的胶条样品大小要求?
A: 胶条以 1 cm*1 cm 为宜, 胶条过大容易导致酶解效率低, 建议分成多份进行 酶解。
Q: 用于质谱检测的胶条样品染色要求?
A: 胶条一般进行银染或者考染; 若检测全部整个泳道蛋白的, 可直接固定无需 染色; 染色无需颜色过深(脱色反而费时)
Q: 用于质谱检测的胶条样品切胶要求?
A:若检测单一蛋白条带,则只切取该蛋白条带位置即可;若检测多个蛋白条带, 则分别切取后合并;若检测整个泳道蛋白,建议样品只跑较短时间浓缩胶或分离 胶即可切取检测。
Q: 用于质谱检测的胶条样品蛋白量要求?
A: 若为单一蛋白条带, 该蛋白量不少于 20μg; 若为多个蛋白条带, 各个蛋白 的蛋白量不少于 20μg;若为整个泳道蛋白,蛋白总量不少于 50μg(其中含量较 低的蛋白不易检测); 若为纯化后蛋白的互作蛋白条带, 建议纯化前蛋白量不少 于 5mg(纯化前蛋白量过低, 导致纯化后互作蛋白含量较低, 检测蛋白数目较 少); 胶条蛋白量不能依靠胶条染色的颜色深浅来判断,因为显色时间越长,颜色会越 深。
Q: 纯化后蛋白可以直接使用蛋白溶液进行检测吗?
A: 不可以, 纯化蛋白时通常会使用抗体(亲和纯化不需要), 如果不进行 SDS-PAGE 分离,抗体会发生干扰;如果进行兴趣蛋白的互作蛋白的研究,则必 须进行SDS-PAGE从而实现将兴趣蛋白排除(。 兴趣蛋白一般会是高丰度的表达, 不排除会造成检测干扰)