蛋白定性分析


蛋白定性通常是基于液质联用(LC-MS/MS)的鸟枪法蛋白鉴定,是基于自上而下(Bottom Up)的分析手段,样本类型通常是SDS-PAGE胶或者IP Pulldown 溶液;该方法适合于对蛋白进行全局定性分析,判断蛋白有无并提高了鉴定低丰度目标蛋白的可能性。 蛋白定性分析适合于低预算,希望找到目标蛋白的大部分科研工作者。

服务流程:

提取 | 分离 | 去除
**蛋白质提取&分离(细胞、组织等)
 样本(细胞、组织等)用新配置的PBS缓冲溶液清洗两次,去除残留的杂质和污染物
 样本离心去除上清或用吸水纸将组织擦干,然后保存液氮或进行下一步提取蛋白。
 细胞沉淀物和组织用ST裂解液buffer裂解(SDS和Tris)。
注意:
#转录因子(Transcription Factors),TF-DNA复合体,通常联合使用脱氧核糖核酸酶从标准的低渗细胞中重获转录因子,这样更便于后续的靶向蛋白定性分析。
#膜结合蛋白通常用各种不同类型的酶解方式,参考流程图中酶解.
**高丰度蛋白去除(血浆,临床样本)
选择性的去除一些已知的高峰度蛋白,特别是在血液样本和临床样本中具有很重要的意义,AIMS提供相关的高丰度蛋白去除服务。
 有化学手段通过使用氯化钠,乙醇,乙腈,二硫化物替换相关实验试剂DTT和TECP等能够特异性的沉降部分高丰度蛋白,通常是血浆白蛋白,能够增加蛋白组检测通量。
 抗体芯片这种方法能去除临床样本中的高丰度蛋白并提高检测通量,然后这样做也有对应的缺点,因为成本相应会较高。
 偶联磁珠的多肽配体文库能够在去除高丰度蛋白的同时富集低丰度蛋白。
图2: 上面写小字(亲和纯化质谱)点击到页面(溶液内蛋白定性)
图4,下面写小字(蛋白预分)可选步骤,我们推荐SDS-PAGE
图5,下面写小字(蛋白酶切)点击后到表格3.
图6,下面写小字(多肽预分)
图7,下面写小字(液质联用)
图8,下面写小字(SDS凝胶电泳)点击后跳转“胶内蛋白分析”子页面
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